By Preparación de tejidos 1. 1. Introducción a la Histología nDefinir que es un tejido celular. OEnumerar los diferentes tipos de tejidos y su clasificación. üDescribir los diferentes pasos del procesamiento histológico para microscopía óptica y electrónica. C]ldentificar el colorante y técnica apropiados para la demostración de un tejido o estructura celular específicos.
C]ldentificar, a partir de imágenes, secciones teñidas con tinciones topográficas, histoquímicas, inmunocitoquimicas, inmunofluorescencia, micrografías electrónicas de transmisión y de barrido. Concepto de Tejido • os tejidos son agrupaciones funcionales de células • Conjunto de células ordenadas en una formación regular. • Entramado, fisiológicamente útil al organismo, constituido por células especializadas morfoló ica funcionalmente. • . 1 Bernardo Castellano. Histología 4 2. 2.
Concepto de HIS ogr «histosi’ que significa ido d estudio o aprendizaj de los tejidos • Histol ende del griego que significa irse como el estudio la estructura, la organización, la función y la capacidad de respuesta de los tejidos • Histología: Ciencia que estudia los entramados celulares, isiológicamente útiles para el organismo, que están constitudos por células especializades morfo ógica y funcionalmente • Histología general: Rama de la Histología que comprende la Citología y el estudio de los tejido báicos. ?? Histología especial: Rama de la Histología que comprende el estudio microscópico de órganos y sistemas. Tejidos fundamentales Clasificación • Tejidos epiteliales – epitelios de revestimiento – epitelios glandulares • Tejidos conectivos – conjuntivo – san sanguineo – adiposo – cartilaginoso – óseo • Tejidos musculares – muscular liso – muscular esquelético — muscular cardiaco • Tejido ervioso 2Bernardo Castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 3. 3.
Tejidos fundamentales Clasificación • Tejidos epiteliales – epitelios de revestimiento – epitelios glandulares • Tejidos conectivos – conjuntivo – sanguíneo — adiposo – cartilaginoso óseo • Tejidos musculares — muscular liso — muscular esquelético – muscular cardiaco • Tejido nervioso Tejidos fundamentales Clasificación • Tejidos epiteliales – epitelios de revestimiento – epitelios glandulares • Tejidos conectivos – conjuntivo — sanguíneo – adiposo — cartilaginoso – óseo • Tejidos musculares — muscular iso – muscular esquelético – muscular cardiaco • Tejido nervioso 3Bernardo Castellano. Histologa Médica.
UAB. 2006 4. 4. Tejidos fundamentales Clasificación • Tejidos epiteliales – epitelios de revestimiento — epitelios glandulares • Tejidos conectivos – conjuntivo – sanguíneo – adiposo – cartilaginoso – óseo • Tejidos musculares – muscular liso – muscular esquelético muscular cardiaco • Tejido nervioso Tejidos fundamentales Clasificación • Tejidos epiteliales – epitelios de revestimiento — epitelios glandulares • Tejidos conectivos – conjuntivo – sanguíneo adiposo – cartilaginoso – óseo • Tejidos musculares – muscular liso — muscular esquelético — muscular cardiaco • Tejido nervioso 4Bernardo Castellano.
Histologia Médica. UAB. 2006 5. 5. Procesamiento histológico para microscopía óptica • Fijación • Inclusión • Obtención de cortes • Tinción • Montaje permanente • Observación al microscopio • Obtención de microfotografías Fijación • Preservar el tejido de la putrefacción, autolisis, etc.. • Endurecer el tejido para permetir su manipulación y evitar alteraciones morfológicas. • Mantenimiento de la citoar ara permetir su manipulación y evitar alteraciones morfológicas. ?? Mantenimiento de la citoarquitectura y ultraestructura. • Mantenimiento in situ de las moléculas (Importante para determinaciones histoenzimáticas e inmunocitoquímicas) Fijadores: aldehidos, alcohol, mercurio, ácido pícrico Formol: formaldehido + metanol Parafolmadehido + tampón fosfato Bouin: ácido pícrico + formol + ácido acético http://’. w. n. w. bris. ac . uk/depts/PathAndMicro/tutoriaIs/sam/samples. html 5Bernardo Castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 6. 6.
Métodos de Fijación Fijación por inmersión 10 volúmenes de ijador Tiempo: 4-24 horas Fijación por perfusión Perfusión: 10 minutos Postfijación por inmersión: 4-24 horas Procesamiento histológico para microscopía óptica • Fijación • Inclusión • Obtención de cortes • Tinción • Montaje permanente • Observación al microscopio • Obtención de microfotograf’as 63ernardo castellano. Histologa Médica. UAB. 2006 7. 7. Inclusión en parafina Inclusión en parafina Infiltración 7Bernardo Castellano.
Histologia Médica. LJAB. 2006 8. 8. Inclusión en parafina Confección de bloques Procesamiento histológico para microscopia óptica • Fijación • Inclusión Observación al microscopio • Obtención de microfotografías 8Bernardo Castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 9. 9. Microtomo de parafina Microtomo de parafina 9Bernardo 10. 10. Microtomo de parafina Microtomo de parafina 10Bernardo 11. 11. Microtomo de parafina Microtomo de parafina 1 1 Bernardo 12. 12. Microtomo de parafina Microtomo de parafina 12Bernardo 13. 3. Obtención de secciones o cortes histológicos • Cortes de parafina 5-10 pm (Micr 14 UAB. 2006 13. 13. Obtención de secciones o cortes histológicos • Cortes de parafina 5—10 pm (Microtomo de parafina) • Cortes por ongelación: 5-30 pm (Criostato) • Cortes vibratomicos 30-50 um (Vibratomo) • Cortes semifinos: 1-2 pm (Ultramicrotomo) • Cortes ultrafinos: 300-700 A (Ultramicrotomo) Grosor de los cortes 13Bernardo Castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 14. 14.
Grosor de los cortes Procesamiento histológico para microscopia óptica • Fijación • Inclusión • Obtención de cortes • Tinción • Montaje permanente • Observación al microscopio • Obtención de microfotografías 14Bernardo Castellano. Histologia Médica. IJAB. 2006 15. 15. Tinciones histológicas • Técnicas topográficas • Técnicas específicas • Técnicas histoquímicas • Técnicas inmunocitoquímicas Tinciones • Tinciones topográficas: basadas en la interacción de sustancias colorantes con las estructuras celulares y tisulares. Colorantes iónicos ácidos: Tienen afinidad por estructuras tisulares con carga positiva – Colorantes iónicos básics: Tienen afinidad por estructuras tisulares con carga negativa Ejemplo: Tinción Hematoxilina-Eosina 153ernardo 16. 16. Tinción de Hematoxilina-Eosina • Hematoxilina – Colorante iónico básico (carga positiva) Tiñe estructuras con carga negativa Núcleos de color azul (basófilos) • Eosina – Colorante iónico ácido (carga negativa) Tiñe estructuras con carga positiva Citoplasmas de color rosado (esosinófilos) Técnica de tinción 16Bernardo 17. 7. Tinciones. Método Tinciones. Método 1 7Bernardo 18. 18. Procesamiento histológico para microscopía óptica • Fijación • Inclusión • Obtención de cortes • Tinción • Montaje permanente • Observación al microscopio • Obtención de microfotografías Montaje Tinción • Montaje permanente • Observación al microscopio • Obtención de microfotografías Montaje de las preparaciones •
Para observar con el microscopio óptico los cortes teñidos se procede a montar las preparaciones utilizando una sustancia cementante (medio de montaje) y un cubreobjetos. • El medio de montaje facilita la observación y si se trata de un medio de montaje permanente estabiliza la coloración histológica durante mucho tiempo. 18Bernardo Castellano. Histologia Médica. UA3. 2006 19. 19. Procesamiento histológico para microscopía óptica • microfotografías Observación al microscopio Obtención de microfotografías 19Bernardo Castellano.
Histología Médica. UAB. 20. 20. Tinciones histológicas • Técnicas topográficas • inmunocitoquímicas Técnicas histológicas específicas • Técnicas para el tejido conjuntivo: tricrómico de Masson, van Gieson • Glucógeno: carmin de Best • Mucinas: azul alcian, mucicarmín • Lípidos: 011 red O, negro sudán B, Os04 • Ácidos nucleicos: naranja de acridina, verde de metilo-pironina 20Bernardo Castellano.
Histologia Médica. UAB. 2006 21. 21. Técnicas histológicas específicas Tejido conjuntivo Tricrómico de Masson Van Gieson Técnicas histológicas especificas Mucinas Azul Alción Mucicarmin 21 Bernardo 22. 22. Técnicas histológicas específicas Lípidos Oil red O Oil red O Oil red O Técnicas histológicas especificas Ácidos nucleicos Verde de metilo – pironina Naranja de acridina 22Bernardo 23. 23.
Tinciones histológicas • Técnicas topográficas • inmunocitoquímicas topográficas • Técnicas específicas • Técnicas histoquímicas • Técnicas inmunocitoquímicas Técnicas histoquímicas Implican una reacción química: transformación de un producto en otro diferente con características diferenciables • PAS (ácido periódico de Shiff): detección de carbohidratos – Ácido periodico que actúa obre los carbohidratos produciendo la formación de grupos aldehidos que son los que reaccionan con el colorante • Lectinas: detección de residuos glucosilados – Lectinas biotinadas.
Tripsina o neuraminidasa para exponer los residuos escondidos. Avidina peroxidasa. Revelado con DAB • Reacción de Feulgen: detección de ADN – Hidrólisis de la unión purina-deoxirribosa con ACI para formar aldheidos que reaccionan con el colorante • Técnicas histoenzimáticas: detección de proteínas enzimáticas 23Bernardo Castellano. Histologia Médica. IJAB. 2006 24. 24. Detección histoquímica de carbohidratos Azul Alcian / PAS
PAS Detección histoquímica de ADN Feulgen Feulgen 24Bernardo 25. 25. Detección histoquímica de residuos glucosilados Lectina de tomate Revelado de la peroxidasa H202 H20 + 1/2 02 DAB DAB-0 25Bernardo castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 26. 26. Técnicas histoenzimáticas • Detección de una fosfatasa: NDPasa NDPasa ADP p + AMP Nitrato Pb Fosfato de Pb Sulfuro amonio Sulfuro de Pb NDPasa Tinciones histológicas • Técnicas Técnicas Inmunocitoquímicas 26Bernardo Castellano.
Histologa Médica. UAB. 2006 27. 27. Técnicas inmunocitoquímicas • Se basan en el empleo de nticuerpos dirigidos hacia epitopos (grupos con características antigénicas) concretos de moléculas • Los anticuerpos son proteinas séricas (inmunoglobulinas) sintetizadas por las células plasmáticas, derivadas de los linfocitos B ac (inmunoglobulinas) sintetizadas por las células plasmáticas, derivadas de los linfocitos B activados tras reconocer un antígeno extraño (inmunógeno).
Usualmente se utilizan IgG o IgM •Anticuerpos policlonales: conjunto de anticuerpos específicos para un inmunógeno (diferentes epitopos) •Anticuerpos monoclonales: específicos de un epitopo único de un nmunógeno Anticuerpos Policlonales Monoclonales 27Bernardo castellano. Histologia Médica. UAB. 2006 28. 28. Detección inmunocitoqu(mica de GFAP Peroxidasa Astrocitos Avidina Biotina Ab2 Abl Golgi GFAP Antígeno GFAP: Glial fibrilar acidic protein Tinciones inmunocitoquímicas Nódulo linfoide, Ki-67 Páncreas, insulina TNF-alfa macrófagos Melanoma, TGF-alfa 28Bernardo Castellano.
Histologia Médica. UAB. 2006 29. 29. Tinciones inmunocitoqu(micas Dobles mardados BL6 nuclear PNA citoplasmatico Inmunofiuorescencia Molécula fluorescente GFAP 29Bernardo Castellano. Histologia Médica. 30. 30. Microscopio de Fluorescencia Filtro barrera Espejo dicroico Filtro excitación Preparación Inmunofluorescencia: dobles marcados GFAP HSP47 30Bernardo castellano. Histologia Médica. 31. 31.
Tinciones inmunocitoquímicas por inmunofluorescencia Tinciones inmunocitoquímicas por inmunofluorescencia Cultivo de células renales Cultivo de células Hella Cultivo células musculares lisas Aparato de Golgi Tubulina A-SM Actina Microtúbulos Actina b-NM Actina Nucleo Núcleo 31 Bernardo 32. 32. Microscopía Electrónica de ransmisión • Fijación: glutaraldehido, paraformaldehido, tetróxido de osmio •
Deshidratación • Inclusión en resinas epoxi • Ultramicrotomía: secciones ultrafinas • Montaje sobre rejillas • Contraste de las rejillas con metales pesados (citrato de plomo) • Observación al microscopio Microscopia Electrónica de Transmisión 32B pesados (citrato de plomo) • Observación al microscopio Microscopía Electrónica de Transmisión 32Bernardo Castellano. 33. 33. Microscopía Electrónica de barrido (Scanning) • Fijación: Deshidratación • Desecación por unto crítico • Sombreado con oro • Observación al microscopio http://ww. w. mos. org /sln/sem/seminfo. ml 33Bernardo Castellano. Histologia Médica. Una constitución (del latín: cum- ‘con, en conjunto’ y statuere ‘establecer’, a veces llamada también carta magna, carta o ley fundamental) es la norma suprema de un Estado de derecho soberano. La constitución fija los limites y define las filiaciones entre los poderes del Estado tradicionalmente, legislativo, ejecutivo y judicial— y de estos con sus conciudadanos, determinando así las bases para su gobierno y para la organización de las instituciones en que tales poderes se sientan, y el reconocimiento de derechos fundamentales.
El término constitución, en sentido jurídico, hace referencia al conjunto de normas que determinan las bases de un ordenamiento juridico de un Estado, especialmente la organización de los poderes públicos y sus competencias, los fundamentos de la vida económica y social, los deberes y derechos de sus ciudadanos. Clasificación[editar] La constitución, como toda ley, puede definirse tanto desde el punto de vista formal com nto de vista material. 4 Desde el punto de vista m stitución es el coniunto de características principales, su supremacía sobre cualquier otra norma del ordenamiento jurídico.
Según su reformabilidad[editar] Según su reformabilidad, las Constituciones se clasifican en rígidas y flexibles. Las Constituciones rígidas son aquellas que requieren de un procedimiento especial y complejo para su reformabilidad; es decir, los procedimientos para la creación, reforma o adición de las leyes constitucionales es distinto y más complejo que los procedimientos de las leyes ordinarias. Constituciones semirrígidas, rígidas o pétreas Son aquellas Constituciones que para modificarse establecen un procedimiento más agravado que el procedimiento legislativo ordinario.
Según el grado de complejidad del mismo se denominarán bien rígidas, bien superrigidas. En la práctica, las Constituciones escritas son también constituciones rígidas; es decir, cuando en un Estado encontramos que existe Constitución escrita, descubrimos que ésta tiene un procedimiento más complejo de reforma o adición que el procedimiento para la creación, reforma o adición de una ley ordinaria. Constituciones flexibles Se modifican mediante el procedimiento legislativo ordinario, lo que significa que una ley del parlamento puede cambiarlas en cualquier momento.
Según su origen[editar] Las Constituciones se diferencian también en función de su origen político: pueden ser creadas por contrato entre varias partes, por imposición de un grupo a otro, por decisión soberana, Constituciones otorgadas[editar] Las Constituciones otorgadas se dice que corresponden tradicionalmente a un Estado monárquico, donde el propio soberano es quien precisamente otorga; es decir, son aquellas en las cuales el monarca, en su carácter de titular de la soberanía, las otorga al pueblo.
En es rte de las siguientes premisas: las otorga al pueblo. En este caso, se parte de las siguientes remlsas: Desde la perspectiva del monarca, es él quien la otorga, por ser el depositario de la soberanía. Es una relación entre el titular de la soberanía -monarca— y el pueblo, quien simplemente es receptor de lo que indique el monarca. Se trata de una Constitución en la cual se reconocen los derechos para sus súbditos. con respecto al poder legislativo.
Constituciones impuestas[editar] Hay Constituciones que son impuestas por el Parlamento al monarca, refiriéndose al Parlamento en sentido amplio, con lo que se alude a la representación de las fuerzas politicas de a sociedad de un Estado, de los grupos reales de poder en un Estado que se configuran en un órgano denominado Parlamento. En este tipo de Constitución, es la representación de la sociedad la que le impone una serie de notas, determinaciones o de cartas políticas al rey, y éste las tiene que aceptar. or lo tanto, en el caso de las Constituciones impuestas existe una participación activa de la representación de la sociedad en las decisiones políticas fundamentales. Constituciones pactadas[editar] En las Constituciones pactadas, la primera idea que se tiene es el consenso. Nadie las otorga en forma unilateral, ni tampoco as Impone debido a que si son impuestas y no se pactan, carecerían de un marco de legitimidad.
Estas Constituciones son multilaterales, ya que todo lo que se pacte implica la voluntad de dos o más agentes; por lo tanto, son contractuales y se dice que parten de la teoría del pacto social. Así, se puede pactar entre comarcas, entre provincias, entre fracciones revolucionarias, etc. Las constituciones pactadas o contractuales implican: 1. una mayor evolución política que en aquellas que son impuestas u otorgadas 2. en las pactadas hay una fuerte influencia de la teoría 0 DF
