By Curva de crecimiento de levaduras gy Rosa7684 03, 2010 17 pagos CURVA DE CRECIMIENTO DE LEVADURAS RESUMEN La cinética de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones más utilizadas por la biotecnología, por lo tanto, es necesario conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, así como, la forma de cuantificación de los mismos. por tanto, el siguiente artículo trata de proporcionar una información general acerca del mecanismos de reproducción en levaduras.
PALABRAS CLAVES: biotecnología, levadura, hemocitómetro, Espectrofotómetro, curva de crecimiento MARCO TEORICO CRECIMIENTO MICR El crecimiento de cél bajo dos aspectos o t Células individu sincronizado y PACE 1 s de os, puede mirarse roductivo. as en crecimiento División estocástica de la población, o división al azar. La división celular se efectúa luego de un aumento en el tamaño de la célula, duplicación del núcleo, división celular, división citoplasmática (salva los organismos cenóticos). Estudintes de Química de Alimentos «*Docente de Biotecnologia de los alimentos De ésta manera una célula da nacimiento a dos células hijas de tamaño idéntico y conteniendo los mismos elementos structurales y potencialidades. MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:EI cálculo del número de células que existen en una suspension se puede llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopía, número de directos y métodos indirectos.
Métodos directos: Recuento del número de células en una cámara Thoma Peso seco celular Determinación de nitrógeno o de proteínas totales Determinación de DNA Métodos indirectos: Recuento de colonias en placa Recuento sobre filtro de membrana Consumo de oxígeno Liberación de dióxido de carbono Concentración de un enzima constitutivo Decoloración de un colorante Incorporación de precursores radiactivos Medida de la turbidez COMPOSICIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LA PRACTICA (YNB).
I COMPONENTES IYNB(IOX) I Lisina(30mg/m L) Triptofano I (30mg/mL) I Histidina I (mL) 110 MEDIO LIQUIDO IMADIO EN IPLACAS(TIL) 10 150 ‘Sulfato de Adenina (2mg/mL) I Uracilo(2mg/mL) Agua Destilada 0. 1 10. 1 11. 5 1. 5 6. 7 YEPD, en un erlenmeyer de 250 m Vasos de precipitado(l litro) Gradilla de tubos de ensayo Tubos de ensayo con tapas EQUIPOS Mechero Bunsen Estufa de incubación a 300C Hemocitómetro Microscopio Espectrofotómetro PROCEDIMIENTO No se realizaron desviaciones del protocolo propuesto RESULTADOS de levaduras Tiempo (horas) 18 112 116 120 124 128 I Tiempo I (horas) 15 Absorbancia(600nm) 10. 073 10. 1 10. 69 11. 243 11. 251 del cultivo de levaduras mediante la dispersión de luz. Este método es muy usado en la práctica cotidiana del laboratorio. Se baso en la capacidad de las células en general de absorber y/o dispersar la luz que incide sobre ellas. El cultivo celular apareció turbio porque las células dispersan la luz que atraviesa la suspensión. La turbidez es proporcional al número de células se pudo medir utilizando un Espectrofotómetro a 600 nm. Este instrumento midió la relación de intensidad de luz incidente con la intensidad del rayo luminoso que salió después de atravesar la muestra.
Cuanto mayor fue el no de células mayor fue la turbidez del cultivo, la densidad óptica (0. 0. ) y menor la cantidad de luz no dispersada que emergió tras atravesar la muestra. La D. O. del cultivo es pues proporcional a la densidad celular. Y El método directo, donde determinamos el no total de células del cultivo de levaduras; mediante el recuento en el microscopio, empleando un hemocitómetro. Donde fue necesario ampliar de x100 a x400 para visualizar la cámara de recuento y las células en suspención.
El procedimiento fue rápido y sencillo; pero no se permitió distinguir células vivas inmóviles de células muertas. En esta práctica a diferencia del recuento bacteriano se pudo observar la CINETICA DE CRECIMIENTO DEL CULTIVO DE LEVADURAS, donde al inicio del proceso se añadió la solución esterilizada de nutrientes, inoculado con las levaduras; permitiendo que se llevara a cabo la incubación en condiciones optimas de fermentación de forma sencilla, a lo largo de todo l proceso se desarrollo una fermentación discontinua (en batch), no se añadió nada.
La composición del medio de cultivo, la concentración de la biomasa cambio generalmente como resultado del metabolismo de las célula cultivo, la concentración de la biomasa cambio generalmente como resultado del metabolismo de las células observándose las cuatro fases típicas de crecimiento: fase de latencia, fase logarltmica, fase estaconaria y fase de muerte. 1. La fase logarítmica, en la que las levaduras se adaptaron a las nuevas condiciones y pusieron en marcha su maquinaria metabólica para poder crecer activamente.
La duración de esta fase fue variable y en general fue mayor cuanto más grande fue el cambio en las condiciones en las que se encontraban las levaduras. 2. La fase exponencial. En esta fase se puede observar un crecimiento equilibrado, donde los constituyentes celulares aumentaron a una rapidez constante, de modo que la población de levaduras se duplicó y continuo duplicándose a intervalos regulares (gráficas), la concentración del sustrato se observo más turbio. 3.
La fase estacionaria, esta fase fue en la que no hubo aumento neto de levaduras, lo que no significa que no se dividan lgunos, sino que la aparición de nuevos individuos se compensa por la muerte de otros. El medio se observó más turbio que los anteriores lo que significa que el medio cambia continuamente. 4. La fase de muerte, no se observa en ninguna de las 3 gráficas por la falta de tiempo en la disposición del laboratorio, pero esta fase es en donde el número de levaduras vivas tenían que disminuir de forma exponencial, por diferentes circunstancias (temperatura, nutrientes, etc).
El crecimiento de las lavaduras se vio afectado por diferente factores dentro de los cuales se destacan: la concentración de las evaduras, nutrientes y la temperatura. La temperatura porque estas tienen una temperatura óptima de crecimiento. Esto significa que a determinada temper estas tienen una temperatura óptima de crecimiento. Esto significa que a determinada temperatura la velocidad de duplicación (o la velocidad de crecimiento poblacional),fue mayor.
Y el efecto de la concentración del nutriente porque gran parte del nutriente se convierte en material celular, y por tanto, si se limita la cantidad de nutriente se convierte en material celular, a bajas concentraciones de nutrientes, éste no puede ser ransportado a la célula a una velocidad suficiente para satisfacer todas las demandas metabólicas(fase de muerte) CONCLUSIONES En esta practica pudimos aprender a realizar un conteo de levaduras mediante el hemocitómetro, conociendo su ciclo de crecimiento (fase de latencia, fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte), con respecto a su tiempo de incubación.
El cálculo del número de levaduras que existen en una suspensión se pudo llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopía) y masa celular (turbidimetría), clasificados en dos apartados: métodos directos y métodos indirectos. La temperatura fue un factor que afecto el crecimiento de las levaduras porque estas tienen una temperatura óptima de crecimiento. Estando fuera del alcance de los estudiantes su control, ya que en el laboratorio se realizan otras practicas, tanto de texistas como de otras asignaturas.
El efecto de la concentración de nutrientes fue otro factor que afecto el crecimiento de las levaduras porque gran parte del nutriente se convierte en material celular, y por tanto, si se limita la cantidad de nutriente se convierte en material celular A bajas concentraciones de nutrientes, éste no puede ser transportado la célula a una velocidad suficiente para satisfacer todas las demandas metabólicas. Y la duplicación tanto del pr velocidad suficiente para satisfacer todas las demandas metabólicas.
Y la duplicación tanto del producto como de las levaduras disminuye afectando su rapidez de crecimiento, creándose la fase de muerte, la cual no se puede observar en las gráficas por el tiempo en la disposición del laboratorio. BIBLIOGRAFÍA BANWART, George. Microbiología de las alimentos. P. 239 HANSEN, Jorgensen. Microbiología de las fermentaciones industriales. Acribia. zaragoza; 1959. p. 480-487, 496, 497. INFOGRAFIA vu»vv. 1 OOcia. com/monografias/biolog(a/ biotecnología cinética del_crecimiento. tml ANEXO «PREGUNTAS» 1 . ¿Cómo puedes asegurar que tienes un cultivo puro de cada microorganlsmo en placa? Cultivo puro: es aquel que contiene una sola especie o tipo de microorganismo y que presumiblemente se ha obtenido a partir de una sola célula. En un cultivo puro, no necesariamente todas las células que lo componen tienen que ser exactamente iguales, ya que es factible que algunas de ellas sufran mutaciones y se diferencien de las restantes. Cada uno de los cultivos puros que componen una especie se denominan cepas.
En el estudio microbiológico, el primer paso es la separación de la población mixta a un cultivo puro y luego su posterior identificación (familia, género, especie). Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población microbiana mixta, se utiliz nadas técnicas de aislamiento, que fueron de urante el siglo XIX. En un introdujo los medios sólidos, complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo así la separación física de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies icrobianas. . ¿Cómo emplearías la temperatura para favorecer o inhibir el crecimiento de bacterias o levaduras? Las bacterias suelen presentar diferentes exigencias en relación a la temperatura de crecimiento. Entre la máxima temperatura, por encima de la cual esta no puede crecer y una temperatura mínima, por debajo de la cual un cultivo no se desarrolla, se ubica en los limites en los que pueda haber crecimiento. Las mejores condiciones de crecimiento de un organismo tienen lugar dentro de unos limites bastante reducidos que es lo que se conoce como temperatura óptima de crecimiento.
La temperatura óptima para el crecimiento de una especie microbiana determinada, está relacionada con la temperatura del hábitat normal del organismo. La influencia de la temperatura sobre el crecimiento, es realmente, una medida de la influencia de la temperatura sobre la actividad enzimática de la célula 3. ¿por qué es una ventaja mantener el tubo de cultivo inclinado cuando se inserta el asa de siembra? Los tubos abiertos deben mantenerse en posición inclinada para que el riesgo de contaminación sea mínimo 4. ¿Para que se flamea la boca del tubo?
La inoculación de medios de cultivo y la manipulación de ultivos microbianos en el laboratorio de microbiología, son procedimientos fundamentales e importantes que deben realizarse tomando una serie de precauclones para evitar la contaminación de la preparación con la que estamos trabajando y a la vez para evitar la contaminación d la preparación con la que estamos trabajando y a la vez para evitar la contaminación del ambiente y del operador. Esta serie de precauciones se conoce como técnica aséptica; entre las pnncpales podemos cltar: Trabajar siempre al lado del mechero. Pasar la punta de los tubos que contienen el cultivo a través de a llama del mechero, a este procedimiento se le conoce como flameado. _ Esterilizar el filamento o el asa colocándola en la llama hasta que esté al rojo vivo. LABORATORIO II 1 . ¿Por qué en un medio definido el requerimiento de aminoácidos es mucho mas bajo que el de glucosa? Concentración de nutrientes: Como ya se dijo, la presencia de sustancias nutritivas adecuadas es una condición necesaria para el crecimiento y desarrollo de la levadura, siendo su concentración un factor primordial en la actividad vital de la levadura.
Las principales sustancias nutritivas y las más nfluyentes son el nitrógeno, fósforo, azufre, vitaminas y trazas de algunos elementos. Concentración del sustrato: El carbono es suministrado por los azúcares contenidos en la materia prima, siendo la concentración de azúcar un valor que se debe considerar ya que afecta la velocidad de la fermentación, el comportamiento y el desarrollo de las células de la levadura. Suele ser satisfactoria una concentración de azúcar del 10 al 18%, el valor más corriente es del 12%.
Cuando se trabaja con concentraciones de azúcar muy altas, del orden de 22%, se observa una deficiencia respiratoria en a levadura y un descenso de la velocidad de fermentación; por el contrario, al trabajar con concentraciones muy bajas, el proceso resulta antieconómico ya que requiere un mayor volumen para la fermentación. Por esto tiene de 10- 15% de azúca sustrato la melaza, que volumen para la fermentación. Por esto se utiliza como sustrato la melaza, que tiene de 10- 15% de azúcar.
Las materias primas más importantes corresponden a fuentes de carbono y de nitrógeno. Las fuentes de carbono pueden ser: 1) Hidratos de carbono como glucosa o dextrosa, sacarosa, lactosa, almidón, dextrina 2) Alcoholes como el glicerol y manitol ) Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros. Son muy importantes también por su disponibilidad y costo reducido otras materias primas que contienen hidratos de carbono como granos, melazas, celulosas, suero de queso, etc. 2.
Explique el uso de los medios definidos y complejos para el crecimiento de bacterias o levaduras Los medios pueden clasificarse, considerando la naturaleza química de los componentes, en: 1) medios sintéticos o medios químicamente definidos, 2) medios complejos en cuya composición intervienen sustancias de origen animal o vegetal como peptonas, extracto de levadura, acerado de maíz, harina de soja, etc. que aportan las sustancias fundamentales ya mencionadas, pero que son químicamente indefinidas y de composición variable.
En el estudio de los medios de cultivo es conveniente considerar en primer lugar el diseño para tratar a continuación la formulación y optimización de los mismos. 3. ¿Por qué es necesario añadir Lisina, adenina e histidina en medio YNB? Para observar la asimilación de azúcares o polialcoholes (celobiosa, eritritol, galactosa, glucosa, inositol, maltosa, manitol, rafinosa, trehalosa y xilosa) se utiliza agar base nitrogenado ffNB).
