By Clonación de DNA en Escherichia coli Para replicar el DNA clonado se pueden utilizar distintos tipos de célula huésped. Uno de los huéspedes más utilizados es la cepa de laboratorio K12 de E. coli. Ésta y otras cepas de E. coli se utilizan como huésped ya que están bien caracterizadas genéticamente Para crear moléculas de DNA recombinante se precisan varios pasos. Si se utiliza un plásmido como vector, el procedimiento es el siguiente: 1. El DNA que se va a clonar se aísla y se trata con una enzima e restricción para crear fragmentos que acaben en secuencias especificas. . Estos fragmentos se li an a moléculas de lásmido obteniéndose un vec OF2 p to nut c las huésped aca de cultivo, as de cada una de las colonias provienen de una sola célula inicial, todas las células de la colonia, y los plásmidos son genéticamente idénticas, o clones. Clonación en huéspedes eucarióticos Hemos descrito la utilización de E. coli como huésped para la clonación. También pueden utilizarse otras especies de bacterias omo huéspedes, como B. subtilis y Streptomyces.
Estos sistemas huésped bacterianos y sus vectores son parecidos a los descritos para E. coli Se han desarrollado va varios sistemas de clonación utilizando huéspedes eucarióticos. Vectores de levadura. Aunque la levadura es un organismo eucariótico, puede manipularse y crecer de manera parecida a las células bacterianas. En levadura hay un plásmido de origen natural, denominado «plásmido 2 micras» que se ha utilizado para construir varios vectores de clonación para levadura.
Combinando secuencias de plásmidos bacterianos con secuencias del plásmido 2 micras, se pueden producir vectores con muchas propiedades útiles. Cromosomas artificiales de levadura. Un segundo tipo de vector de levadura es el cromosoma artificial de levadura (YAC, del inglés ‘Yeast artificial chromosome»). De tipo lineal, un YAC contiene telómeros de levadura en cada extremo, un origen de replicación y un centrómero de levadura que permite la distribución del YAC replicado a las células hija urante la división celular.
El YAC también contiene un marcador de selección en cada brazo, y un grupo de sitios de restricción únicos para insertar DNA. Aunque la clonación en levaduras es uno de los sistemas actuales de huésped eucariótico más avanzado, también se están desarrollando otros huéspedes fúngicos. Además, otros sistemas huésped eucarióticos, entre los que se incluyen cultivos tisulares de células de plantas y de mamíferos, son muy prometedores.
