By ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL MATERIAL DE REPARACIÓN RADICULAR ENDOSECUENCE Y DEL MTA PROROOT CONTRA LOS AISLADOS CLINICOS DE ENTEROCOCOS FAECALIS KAREN F. LOVATO, CHRISTINE M. SEDGLEY. Los materiales endodonticos de reparación son usados para varios procedimientos, y los cuales incluyen recubrimiento pulpar, apexificacón, obturados de la punta de la raíz, y reparaciones de las perforaciones. facilitada por medio OF13 propiedades de mani Svipe nextp las perforaciones ina a filtración microbian los materiales es de reparación y las tias.
Por ejemplo, as pueden conducir en consecuencla racaso del tratamiento endodontico. De los materiales de reparación existentes, el agregado de trióxido mineral (MTA) tiene vanas propiedades ventajosas las cuales incluyen buena capacidad de sello, biocompatibilidad, y actividad antibacteriana. Sin embargo, una desventaja potencial es que se ha reportado que el tiempo de fraguado para el MTA ProRoot blanco es de 40 ± 2. 9 minutos para el fraguado inicial y 140 ± 2. 6 minutos para el fraguado final, mientras que el tiempo de fraguado para el MTA gris tiene un promedio de 165 ± 5 minutos.
Los materiales biocerámicos con un tiempo de fraguado más corto y una onsistencia uniforme durante la colocación podr[an proporcionar una alternativa exitosa al MTA con mejoría de las características de manipulación. El material de reparación radi radicular Endosecuence (ERRM) es un biomaterial bio cerámico producido como una masilla moldeable premezclada (ESP) o como una pasta inyectable pre-cargada (ESS) con puntas de suministro para la liberación intraconducto del material. Existe poca información disponible sobre el material.
En un estudio, las pruebas de citotoxicidad celular (ensayos de metil-thiazol- difeniltetrazolio) con las células L 929 no mostraron ninguna iferencia entre los estados mezclados fraguados o frescos del MTA blanco, MTA gris, y ERRM. De acuerdo al fabricante, ERRM tiene un tiempo de trabajo de 30 0 más minutos, y posee propiedades antibacterianas durante su reacción de fraguado debido a su pH altamente alcalino. Se encontró que la citotoxicidad de los materiales era similar a la de ProRoot MTA y MTA Angelus.
Se ha demostrado que un similar material fabricado como sellante bajo el nombre de iRootSP en Canadá posee una adecuada capacidad de sello apical, citotoxicidad leve, y actividad antibacteriana durante hasta 7 ías después de la colocación. Sin embargo, en este momento, no parece existir ninguna información independiente sobre las propiedades antibacterianas del producto de masilla moldeable entre la masilla y el material inyectable. Los enterococos son microorganismos gram-positivos que son parte de la flora normal del tracto gastrointestinal de humanos.
Enterococus faecalis puede ser recuperado de los conductos radiculares de dientes con infecciones primarlas y secundarias del conducto radicular. Las cepas clínicas demuestran varias características de virulencia; por ej conducto radicular. Las cepas clínicas demuestran varias características de virulencia; por ejemplo, la actividad de la gelatinasa, la cual podría contribuir a la supervivencia a largo plazo de E. Faecalis en conductos radiculares obturados.
La especie es comúnmente usada para evaluar la eficacia antimicrobiana de los materiales usados en el tratamiento endodóntico, pero frecuentemente usando una sola cepa proveniente de una fuente no endodóntica en oposición a múltiples cepas aisladas de conductos radiculares infectados. Teniendo como base la existencia de características variables de las cepas clínicas de E. Faecalis recuperadas de conductos radiculares infectados, es posible que las cepas se diferencien en relación a su susceptibilidad a la actividad antimicrobiana del material de reparación radicular.
El objetivo de este estudio in Vitro fue determinar si las formas de ERRM, tanto en masilla como inyectable tienen propiedades antibacterianas comparables al MTA durante su reacción de fraguado contra una colección de cepas de E. Faecalis aisladas de conductos radiculares infectados. Las hipótesis a probar fueron: 1) ESP y ESS tienen actividad bacteriana durante la reacción de fraguado. ) no existe diferencia entre ESP, ESS, y MTA en relación a la actividad antibacteriana. 3) las cepas de E. Faecalis aisladas de los conductos radiculares se diferencian en relación a la susceptibilidad a los materiales.
Materiales y métodos. Cepas bacterianas y medios. Las cepas E. Faecalis (n = 10) aisladas previamente de conductos radiculares infectados fueron selecciona 30F Faecalis (n – 10) aisladas previamente de conductos radiculares infectados fueron seleccionadas para ensayos anti bacterianos teniendo como base la diversidad de las características fenot[picas, genotipicas, y de formación de biopelícula. Las cepas fueron tomadas de reservas a -80 0C y se colocaron en placas sobre caldo Todd Hewitt complementadas con agar al 1. 5% y se Incubaron aeróbicamente durante 24 horas a 37 0C.
La colonia esperada y la morfología celular así como la reacción a la tinción gram fueron verificadas para cada cepa. Para los experimentos, una unidad formadora de colonia aislada (CFIJ) de cada cepa fue suspendida en 5 ml de caldo de infusión de cerebro – corazón (BHI) durante la noche. Luego, se agregaron O. 5 ml de la suspensión a 4. 5 ml de caldo BHI y crecieron hasta alcanzar una densidad óptica de OD 650 de O. 6, lo cual se demostró en estudios pilotos que correspondía aproximadamente a 3 x 107 CFU/mililitro. Preparación de los materiales para los ensayos antimicrobianos.
El material de masilla de reparación radicular EndoSecuence (ESP), el material inyectable de reparación radicular EndoSecuence (ESS) y el MTA ProRoot blanco fueron comparados en relación a la eficacia bacteriana usando el test de contacto directo basado en anteriores estudios, incluidos los controles para el efecto portador. Una sección de área fija de 3 mm de diámetro con un espesor de 1 mm sobre el lado de un pozo de una placa icrotiter de 96 pozos colocados verticalmente, se cubrió con una cantidad igual de material usando la punta de una espátula de mezcla.
MTA fue PAGF40F se cubrió con una cantidad Igual de material usando la punta de una espátula de mezcla. MTA fue mezclado y manipulado de acuerdo a las instrucciones del fabricante. ESP y ESS son suministrados de forma premezclada, y de acuerdo al fabricante, requieren de la presencia de humedad para iniciar la reacción de fraguado. Se hicieron observaciones iniciales que mostraban que ESP y ESS no se fraguaban en los pozos durante un periodo e 5 días, cuando se conservaban aeróbicamente a 37 0C con humedad de más del 95%.
Siguientes estudios piloto demostraron que cuando ESP y ESS en los pozos estaban cubiertos con agua destilada estéril (SDW; 100 VI por pozo) ocurría el inicio del proceso de fraguado. Después de 30 minutos, ESP y ESS permanecían blandos y penetrables a un explorador endodóntico. Hacia las 24 horas, ESP y ESS habían obtenido un estado endurecido impenetrable al explorador endodontico usando hasta 50 g de presión, después de lo cual el material se desmoronaba. MTA, el cual no estaba cubierto con SDW, también permanecía sin fraguarse a los 30 minutos.
A las 24 horas, MTA era impenetrable a la punta del explorador usando una presión de hasta 25 g, después de lo cual el material se desmoronaba. por tanto, para evaluar si las diferentes etapas de la reacción de fraguado están asociadas a variaciones de la actividad antimicrobiana, los materiales eran preincubados durante 30 minutos y 24 horas, aeróbicamente a 37 0C con humedad de más del 95% antes del la exposición a las bacterias. Durante el período de preincubación, ESP y ESS eran cubiertos con 1 00 pl de SDW, las bacterias.
Durante el período de preincubación, ESP y ESS eran cubiertos con 1 00 pl de SDW, el cual era removido con una pipeta estéril al final del período. Ensayos antimicrobianos con el test del contacto directo. Se colocó una suspensión bacteriana de 10 pl sobre la superficie de ESP, ESS y MTR Las suspensiones de las cepas (10 pl) colocadas en pozos descubiertos sirvieron como controles no expuestos (positivos). Los materiales incubados sin bacterias sin,’ieron como controles negativos.
Todas las muestras fueron incubadas aeróbicamente durante 1 hora a 37 0C con humedad del 95%; luego se agregaron 240 pl de caldo BHI a cada uno e los pozos y se mezclaron suavemente con una pipeta durante 1 minuto. Se prepararon diluciones en serie del caldo BH y se colocaron en placas sobre el agar BHI. Después de la Incubación aeróbica durante 24 – 48 horas a 37 0C, las CPU fueron enumeradas, y se calculó CFU/mililitro. Los experimentos fueron realizados duplicadamente. Controles para el efecto portador.
Para investigar el potencial del efecto portador antimicrobiano de los materiales, se realizaron procedimientos de acuerdo a Zhang y colaboradores. ESP, ESS y MTA fueron preincubados durante 30 minutos y 24 horas tal como lo descrito anteriormente, ncluido el cubrimiento de ESP y ESS con SDW, el cual fue aspirado después del periodo de incubación. Se colocó SDW fresco (10 pl) en contacto directo con los materiales. Después de incubar 1 hora a 37 0C, se agregaron 240 pl de caldo BHI a los pozos y se mezclaron suavemente con una pipeta durante 1 minuto.
Después de I de caldo BHI a los pozos y se mezclaron suavemente con una pipeta durante 1 minuto. Después de la mezcla, se transfirieron 10 pl de caldo a 970 pl de caldo 31-HI a los cuales se agregaron una suspensión de 20 pl de bacterias. Como controles, se colocó la misma cantidad de SDW obre la pared de los pozos descubiertos y se procesó tal como lo delineado antes. Las diluciones en serie de las suspensiones de prueba y de control fueron procesadas para determinar CFU/ mililitro, de acuerdo a lo descrito anteriormente.
Las pruebas del portador se realizaron triplicadamente_ Los conteos viables de bacterias de los controles fueron comparados con los expuestos al material para cada per[odo preincubación; ninguna diferencia de los conteos viables indicaba ausencia del efecto del portador. Análisis estadístico. Los conteos viables fueron formados a sus valores de logaritmo de 10. Se confirmó que la información estaba normalmente distribuida, mediante el uso de los tests de la normalidad de Kolmogorov-Smirnov.
El análisis de varianza y las comparaciones múltiples de Tukey fueron usadas para evaluar: 1) si ESP, ESS, y MTA ten[an propiedades antibacterianas mediante la comparación de los conteos viables de las bacterias expuestas y no expuestas. 2) la actividad antibacteriana de ESP, ESS y MTA durante sus períodos de fraguado mediante la comparación de la reducción de los conteos viables de las bacterias expuestas a los materiales prencubados durante 30 minutos 0 24 horas, ntes de la exposición a las bacterias. ) las variaciones de la susceptibilidad de diferentes cepas de 7 OF la exposición a las bacterias. 3) las variaciones de la susceptibilidad de diferentes cepas de E. Faecalis mediante la comparación de la reducción de conteos viables después de la exposición a ESP, Ess, y MTA. Se usó el software prism 4. Oa de Macintosh para los análisis estadísticos. La significancia se estableció en p 05. Resultados. Controles. E. Faecalis no fue recuperado de ninguno de los controles negativos en las pruebas de los contactos directos.
No hubo videncia de portador del efecto antibacteriano desde los materiales a los cultivos bacterianos. Actividad antibacteriana de ESP, ESS, y MTR Al combinar la información de todas las cepas, el promedio desviación estándar) los conteos viables logaritmo de 10 para ESP (4. 55 ± O. 85), ESS (4. 5 95), y MTA (4. 1. 26) fueron significativamente menores en comparación a los controles no expuestos (7. 40 ± O. 33; p 0001 Las diferencias entre los materiales no fueron sign’ficativas.
Actividad antibacteriana durante la reacción al fraguado. La reducción de los conteos viables después de la preincubación urante 30 minutos (2. 90 ± O. 55, ESP; 2. 97 * O. 73, ESS; 3. O. 77, MTA)y 24 horas (2. 81 ±0. 47, ESP; 2. 93 ± O. 81, ESS; 3. O. 94, MTA) no fueron significativamente diferentes (P 05; figura Comparación de la susceptibilidad de las diferentes cepas. En la tabla 2 se presentan las reducciones con logaritmo de 10 de los conteos viables para las cepas expuestas a ESP, ESS, y MTA.
El promedio de la reducción desviación estándar) en los conteos viables con logaritmo de 10 80F MTA. El promedio de la reducción (± desviación estándar) en los conteos viables con logaritmo de 10 varió desde 2. 7 ± O. 62 para E. Faecalis GS33 hasta 3. 36 ± 0. 47 para E. Faecalis GS2 cuando se expusieron a ESP, desde 1. O. 44 para E. Faecalis GS25 hasta 4. 21 ± 1. 42 para E. Faecalis GS9 cuando se exponían a ESS, y desde 1. 86 ± O. 24 para E. Faecalis GS4 hasta 4. 78 ± O. 42 para E. Faecalis GS9 cuando se expusieron a MTA.
La más grande reducción de los conteos viables ocurrió con GS9; esta cepa fue significativamente más susceptible que GS7, GS25, y GS33 (P 05) y GS4 (P 01) (figura 2). No hubo diferencias entre las otras cepas. Discusión. Los resultados de esta investigación in vitro mostraron que la asta premezclada y la pasta inyectable de reparación radicular EndoSecuence así como MTA ProRoot blanco tienen propiedades antibacterianas contra las cepas cl[nicas de E. Faecalis durante su periodo de fraguado. No hubo ninguna diferencia entre los materiales y su eficacia antibacteriana.
Las cepas clínicas variaron respecto a la susceptibilidad a los materiales probados. Todas las hipótesis probadas fueron aceptadas. El fundamento para la selección de un período preincubación de 30 minutos durante el proceso de fraguado se basó en la información del fabricante de que el material tiene un tiempo de rabajo de más de 30 minutos. Los estudios piloto demostraron que los materiales todavía estaban fraguandose a las 24 horas; por tanto, esto fue incluido como un período de fraguado provisional del material.
Para ambos periodos de tiempo, los materia como un período de fraguado provisional del material. Para ambos periodos de tiempo, los materiales tenían similares efectos antibacterianos contra las cepas E. Faecalis. ERRM es un material biocerámico compuesto de silicatos de calcio, oxido de circonio, oxido de tantalio, fosfato monobásico de calcio, agentes espesantes, y rellenos. EndoSecuence ha sido abricado para superar algunas de las características difíciles de manejo de MTA.
El material tiene muy diferentes propiedades de trabajo; MTA tiene que ser mezclado con un liquido estéril con una consistencia deseada, y los materiales EndoSecuence están listos para usar como paquete conjunto. Dependiendo de la consistencia deseada, ERRM es fabricado de una forma inyectable, la cual es fluible, y una forma de masilla, la cual es firme y moldeable. Una dificultad encontrada durante la investigación fue la obtención de un fraguado completo de los materiales Endosecuence. El fabricante señala que la humedad resente en los túbulos dentinarios es adecuada para permitir el fraguado del material.
En los estudios piloto, se observó que los materiales comenzaban a fraguarse solamente cuando estaban completamente cubiertos de agua. En otro estudio se reportó incapacidad de los materiales tanto en masilla como inyectables, incubados a 37 0C con humedad del 1 00%, para soportar una carga de 500 g hasta 1 68 horas. Similarmente, recientemente se reporto que el sellante Endosecuence BC requería 108 horas (4. 5 días) mezclado con agua para lograr un fraguado inicial; el fraguado final ocurría a las 168 horas (7 días); este 0 DF 13
